Bradford蛋白濃度測定試劑盒（去垢劑兼容型）

Bradford Protein Assay Kit（Detergent Compatible）

● 試劑盒內(nèi)容及保存：

● 儲存條件和效期：

考馬斯亮藍G-250染色液（去垢劑兼容型）4℃貯存；牛血清白蛋白標準溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。本試劑盒有效期1年。試劑盒常溫運輸。

● 產(chǎn)品簡介：

Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑兼容型)其原理是考馬斯亮藍G-250在酸性條件下和蛋白質(zhì)結(jié)合，使得染料最大吸收峰從465nm變?yōu)?95nm，在一定的線性范圍內(nèi)，反應液595nm處吸光度的變化量與反應蛋白量成正比，測定595nm處吸光度的增加即可進行蛋白定量。該試劑盒進行了優(yōu)化，能兼容一系列常見去垢劑和一定濃度的還原劑，并且檢測數(shù)據(jù)有很好的線性關(guān)系。本試劑盒的性能不僅優(yōu)于常規(guī)的Bradford法，和BCA法相比也更加快速便捷。

蛋白研究中許多蛋白樣品都是含有去垢劑，因此常規(guī)Bradford法的使用受到了很大的限制，通常只能使用可以兼容去垢劑但檢測比較耗時的BCA法。但BCA法無法兼容還原劑。當?shù)鞍讟悠分型瑫r含有一定濃度的去垢劑和還原劑時，常規(guī)的Bradford法和BCA法都無法使用，而本試劑盒仍然是可以檢測的。試劑盒兼容蛋白提取的多種裂解液，包括 Western及IP細胞裂解液、RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液等。

按照每個10 μl樣品使用300 μl染色染色液計算，試劑盒可以至少檢測800個樣品。

● 產(chǎn)品特點：

1. 檢測速度快，10-20個樣品只需不足10分鐘即可完成。

2. 靈敏度高，檢測濃度下限可達25 μg/ml （測定濃度范圍在50-1000 μg/ml內(nèi)有較好的線性關(guān)系），最小檢測蛋白量可達0.5 μg。

3. 該試劑盒測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質(zhì)的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1 M，DTT的濃度可高達5 mM。同時，此方法測定蛋白濃度可以兼容受高濃度的去垢劑影響，可以適用于膜蛋白樣品的濃度測定。蛋白樣品中SDS濃度低于1%，Triton X-100濃度低于1%，Tween 20, 60, 80濃度低于1%，NP-40濃度低于1%都可以定量。

● 操作方法：

用前注意事項：

蛋白標準請全部溶解混勻后再使用。

需可檢測560-610 nm之間波長的酶標儀一臺，最佳檢測波長為595 nm。并需96孔微孔板。

微孔板測定程序：（最佳工作范圍50-1000 μg/ml）

1． G-250染液在使用前應平衡溫度至常溫并溫和顛倒混勻。

2． 1 mg/ml蛋白標準品配制：常溫完全溶解蛋白標準品，取20 μl 5 mg/ml BSA蛋白標準溶液，加入80 μl PBS溶液，使其終濃度為1 mg/ml。

3． 按照下表配制BSA標準測定溶液：

4． 取10 μl不同濃度蛋白標準加到96孔微孔板的蛋白標準孔中。

5． 將適當體積的待測樣品加入到微孔板中，如果樣品不足10 μl，用PBS補足到10 μl；

6． 向微孔板中加入300 μl G-250染色液，混勻，常溫放置 3-5 min。

7． 用酶標儀測定A₅₉₅波長的吸光度，以不含BSA 的樣品的光吸收值作為空白對照?？梢粤⒓礈y定吸光度，也可以在30分鐘內(nèi)測定，30分鐘內(nèi)檢測數(shù)據(jù)無顯著變化。對于不含去垢劑和含有某些去垢劑的情況，在2小時內(nèi)檢測數(shù)據(jù)無顯著變化；對于含有某些特定去垢劑的情況，在2小時內(nèi)檢測數(shù)據(jù)會有一定的變化，但仍然會呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。

8． 以A₅₉₅為縱坐標，BSA含量為橫坐標，繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標準曲線范圍內(nèi)，請稀釋樣品后重新測定。

注：如使用分光光度計測定，可根據(jù)實際需要擴大溶液體積，保證蛋白標準溶液和蛋白樣品與 G-250染液的體積比為 10:300，例如，如果需要 1.5 ml，可取蛋白樣品 50 μl，G-250染液試劑 1.5 ml。

 試劑盒對常見去垢劑的兼容性